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随着基因组研究的不断推进,单分子实时测序系统以PacBio测序为代表的第三代基因测序技术逐渐应用到多个科研领域。该平台利于单分子实时测序技术,又称作SMRT测序,基于纳米小孔的单分子读取技术,无需扩增即可快速完成序列读取。PacBio
Sequel测序仪是美国太平洋生物技术公司基于PacBio
RSII平台的基础上,新推出的第三代测序平台,该系统以测序通量高、单Gb数据成本低、周期短而突出于RSII平台。
§ 单分子实时测序系统SMRT技术原理:
单分子实时测序建立在两项关键的技术创新之上,克服了测序领域的重大挑战。
1、零模波导孔技术只允许激光照亮反应孔底部,也就是DNA聚合酶和模板复合物固定的位置。
2、荧光基团标记在核苷酸的三磷酸末端,不仅可以模拟天然DNA链合成过程,而且可以实时记录复合物上碱基掺入的顺序。
§ 单分子实时测序系统特点:
单分子实时测序技术可以提供长读长序列和均一覆盖度的数据,完成迄今为止更为全面的基因组从头组装。真正的全基因组测序应该为基因组中所有类型的变异提供完整且准确的信息,包括结构变异、可移动元件、单体型、低复杂度区域以及表现遗传学修饰。
◐ 超越基因组草图,产生Mb大小的contigs和完整基因组拼接;
◐ 获得SNPs及其他基因组变异;
◐ 呈现基于扩增的测序技术无法获得的基因组区域;
◐ 包含启动子区的完整基因模型注释;
◐ 获得二倍体基因组的单体型信息;
◐ 捕获表现遗传学信息。
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